琼脂糖凝胶配制方法

配琼脂糖凝胶看似简单，但火候和手法不对，跑出来的条带全是拖尾或断裂。其实只要掌握“彻底溶解”和“均匀冷却”两个核心点，就能避开绝大多数坑。

一、按需求定浓度、备齐基础工具

配制前先确定目的：分离大片段DNA用低浓度（0.6%-0.7%），常规小片段用中浓度（1%-1.2%），高分辨率需高浓度（1.5%-2.0%）。浓度越高，胶越脆，操作时需更小心。

准备超纯水、琼脂糖粉末、TAE或TBE缓冲液、微波炉或电热板、锥形瓶及防烫手套。注意：必须使用分子生物学级琼脂糖，普通食品级杂质多，会干扰电泳结果。

二、三步加热溶解，严防暴沸与焦糊

1. 混合溶解：将琼脂糖粉加入缓冲液中，轻轻摇晃使粉末湿润无干粉结块。若直接干烧，粉末极易粘底焦糊，导致背景噪音增高。
2. 间歇加热：放入微波炉高火加热30秒至1分钟，取出摇匀；重复此过程直至溶液清澈透明。判据：观察溶液呈完全无色透明状，无白色颗粒悬浮。若发现溶液变黄，说明过热分解，需重新配制。
3. 冷却降温：加热完成后，静置冷却至约50-60℃（手感温热但不烫手）。此时若温度过高倒入模具，胶面易产生大量气泡且变形；温度过低则迅速凝固无法铺平。

三、注模凝固与常见问题修正

1. 去除气泡：若溶液中已有微小气泡，可在注入梳子前用酒精灯火焰快速掠过液面，利用表面张力破坏气泡。
2. 自然凝固：倒入制胶槽，静置等待20-30分钟。判据：轻触胶面不粘手，且边缘与玻璃板间有轻微收缩缝隙，即为凝固完成。

• ⚠️如果胶体出现分层或浑浊：通常是缓冲液浓度错误或琼脂糖质量不佳，建议更换新鲜配制的缓冲液和高纯度琼脂糖。

📌总的来说，记住“低火慢溶、看清透明、手温倒板”这十二字口诀，能解决90%的制胶失败问题。

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