SDS-PAGE制胶全攻略

一、制胶步骤拆解手册

想让蛋白条带跑得漂亮？先从完美制胶开始！按这个顺序操作就像搭积木一样简单：

1. 装配模具：玻璃板对齐卡入夹子，底部用1%琼脂糖密封防漏

2. 配分离胶：30%丙烯酰胺与缓冲液按比例混合（如10ml体系加4ml储存液）

3. 灌胶除泡：沿玻璃板夹角缓慢倾倒，酒精压平液面消除气泡

4. 叠加浓缩胶：分离胶凝固后，换5%丙烯酰胺混合液二次灌胶

5. 插梳定型：斜45度插入样品梳，避免产生半月形加样孔

二、时间控制黄金法则

实验室里最常被问的其实是——这胶到底啥时候能用？记住这些节点：

1. 分离胶凝固：室温25℃需45分钟（冬季延长至1.5小时）

2. 浓缩胶定型：插梳后30分钟可轻触检查弹性

3. 最佳使用期：现制现用效果理想，4℃保存不超过48小时

4. 急救方案：急需使用时可用冰浴加速凝固，节省1/3时间

三、新手避坑指南

这些血泪经验帮你少走弯路：

• 丙烯酰胺温度影响凝固速度，冷藏储存液需回温再用

• 过硫酸铵现配现用，发黄的催化剂会让胶变脆

• 拔梳后立即冲洗加样孔，防止残留胶块干扰电泳

• 浓缩胶若分层失败，多半是分离胶表面未用去离子水冲洗

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