小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞提取

小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞提取的步骤如下：

小鼠处死与组织获取：采用颈椎脱臼方式处死小鼠，用剪刀剪开小鼠腹部，取出肠系膜淋巴结（MLNs），置于冰浴的1×PBS溶液中。

组织研磨：将MLNs置于200目钢网上，取少许PBS溶液润湿，用流式管磨碎。

细胞悬液收集：用塑料吸管取3ml PBS溶液，冲洗钢网，转移细胞悬液至15ml离心管中，使用大离心机以2000rpm离心10分钟。

细胞重悬与过滤：去上清，加入1ml PBS溶液重悬，200目尼龙网过滤至新的2ml Ep管中，冰浴或4保存至使用。

细胞计数：取5μl细胞悬液，以体积比1：100与1×PBS溶液稀释混匀，取10μl稀释液加入到细胞计数板上，显微镜下计数。

另一种提取方法的步骤如下：

小鼠处死与组织获取：将小鼠脱颈处死后立即浸泡于75%酒精中，转移至生物安全柜，无菌条件下收取小鼠肠系膜淋巴结，放于含少量1640完全培养基的培养皿中。

组织研磨与过滤：用1mL注射器的活塞尾端充分研磨淋巴结，至无明显组织块，将研磨液经40μm的滤网过滤，收集细胞悬液。

细胞离心与洗涤：以1500转/min离心5分钟，弃上清。如果细胞沉淀中红细胞过多，可用2mL 1×红细胞裂解液裂红，裂红后需用1640完全培养基洗1次。

细胞重悬与计数：加入3mL 1640完全培养基，重悬细胞为单细胞悬液，进行计数。