琼脂糖凝胶电泳原理与注意点

一、琼脂糖凝胶电泳工作原理

想象凝胶是一个分子筛子：

• 分子筛效应：琼脂糖形成三维网状结构，小DNA片段跑得快，大片段被卡住

• 电场驱动：DNA带负电，在电场中向阳极移动

• 染色原理：溴化乙锭插入DNA碱基对，紫外线下发光

• 浓度选择：0.8%凝胶适合1-10kb片段，2%凝胶分辨100-1000bp小片段

二、实验操作关键控制点

这些细节决定电泳成败：

1. 缓冲液新鲜度：TAE使用超过5次会降低离子强度

2. 电压选择：5V/cm是通用设置，高压易导致条带模糊

3. 上样量控制：50μL体系加2μL 6×Loading Buffer

4. 温度影响：夏天需冰浴防止凝胶熔化

三、安全与结果优化

既要好结果也要保安全：

• 溴化乙锭替代品：Sybr Safe毒性降低100倍

• 条带扭曲排查：检查凝胶是否均匀凝固

• marker选择：50bp-10kb范围覆盖待测片段

• 紫外观察：30秒内完成拍照避免DNA降解

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