电子显微镜超薄切片制备

一、样品前处理：打好基础

就像盖房子需要稳固地基，超薄切片制备始于细致的样品前处理：

1. 化学固定：用戊二醛和锇酸双重固定，前者稳定蛋白质，后者保护脂类结构

2. 脱水处理：梯度酒精或丙酮逐步替换水分，避免样品收缩变形

3. 渗透包埋：环氧树脂慢慢浸润样品，65℃聚合12小时形成坚硬包埋块

二、超薄切片：刀尖上的艺术

切片过程堪比微雕工艺，需要耐心和手感：

1. 修块定位：在立体显微镜下将包埋块修成梯形，暴露目标区域

2. 玻璃刀制备：专用划刀仪制作45°角玻璃刀，刀口需在显微镜下检查

3. 切片收集：用睫毛笔将70-90nm厚切片转移至铜网，水面张力是关键助手

三、染色增强：让细节说话

最后一步为样品穿上"显色外衣"：

• 醋酸铀染色：增强核酸和蛋白质对比度，避光操作20分钟

• 柠檬酸铅染色：突出膜结构，注意避免二氧化碳污染产生沉淀

• 双蒸水漂洗：彻底去除残留染色液，防止污染电镜镜筒

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