寻源宝典PD-10柱使用指南
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上海木辰生物科技有限公司
上海木辰生物科技有限公司,2020年成立于上海市,主营滤芯吸头、移液吸头等,专业权威,经验丰富。
介绍:
本文详细介绍PD-10脱盐柱的操作方法,包括预处理、样品加载和洗脱步骤,帮助用户掌握快速纯化蛋白和核酸样品的实用技巧。
一、PD-10柱的前期准备
PD-10柱就像微型净水器,使用前需要激活它的‘过滤能力’。将柱体垂直固定后,用3-5倍柱体积的缓冲液冲洗,直到流出液pH值与缓冲液一致。这个步骤能去除储存液中的防腐剂,同时让填料充分溶胀,为后续分离创造理想条件。
二、样品加载的黄金法则
样品上柱是决定纯化效果的关键环节:
体积控制:样品量不超过柱床体积的30%
浓度把握:蛋白样品建议浓度在1-5mg/mL
流速技巧:重力自然流下,避免加压操作
当样品完全渗入柱床后,立即加入少量缓冲液冲洗管壁残留。
三、高效洗脱的实战技巧
收集洗脱液时记住‘少量多次’原则:
前0.5mL弃去(含残留杂质)
中间1mL是目标产物富集区
最后0.5mL可能含微量杂质
用1.5倍柱体积的缓冲液分段收集,紫外检测仪实时监测可精准捕获目标峰。
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