WB转膜缓冲液配制指南

一、试剂准备与比例

配制WB转膜缓冲液需要以下试剂：Tris碱、甘氨酸、甲醇和蒸馏水。典型配方为：25mM Tris碱、192mM甘氨酸、20%甲醇。以配制1L缓冲液为例，需称取3.03g Tris碱、14.4g甘氨酸，加入200mL甲醇，最后用蒸馏水定容至1L。甲醇浓度可根据蛋白分子量调整，小分子蛋白可降至10%，大分子蛋白可增至25%。

二、配制步骤详解

1. 溶解Tris碱：先用800mL蒸馏水溶解Tris碱，磁力搅拌至完全透明

2. 加入甘氨酸：缓慢加入甘氨酸粉末，避免结块

3. 甲醇混合：在通风橱中加入甲醇，搅拌5分钟

4. 定容调节：用蒸馏水定容至1L，pH应为8.3左右无需调节

三、使用与保存技巧

新鲜配制的缓冲液建议预冷至4℃使用，转膜效率更高。剩余缓冲液可密封避光保存于4℃冰箱，2周内有效。若出现沉淀或浑浊应弃用。转膜时确保海绵、滤纸和膜完全浸透缓冲液，避免产生气泡影响转膜效果。

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