电泳制胶三步走

一、试剂准备与配比计算

电泳制胶就像做蛋糕，原料配比决定成败。首先根据目标DNA/RNA片段大小选择合适浓度的琼脂糖（0.8%-3%），每100mL TAE/TBE缓冲液加入0.5-1g琼脂糖粉末。关键细节：

• 缓冲液需现配现用，避免离子强度变化

• 加热溶解时控制70℃以下，防止过度沸腾

• 加入核酸染料需在降温至60℃后进行

二、灌胶与凝固技巧

完美的凝胶需要‘温柔以待’。将溶解好的琼脂糖溶液沿玻璃板内侧缓慢倒入制胶槽，避免产生气泡。注意：

1. 插梳子时保持垂直，深度为齿长的2/3

2. 室温凝固25分钟或4℃加速凝固15分钟

3. 拔梳子前用缓冲液润湿胶孔防撕裂

三、问题排查与优化

遇到条带模糊或跑偏？试试这些方法：

• 条带扩散：降低电压或缩短电泳时间

• 泳道弯曲：检查缓冲液是否足量且水平

• 背景杂斑：更换新鲜缓冲液或降低染料浓度

• 凝胶断裂：增加琼脂糖比例或延长凝固时间

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