蛋白电泳制胶全攻略

一、制胶前的必要准备

就像烘焙前要备齐材料，电泳制胶也需要这些基础配置：

1. 器材消毒：玻璃板需用酒精擦拭，避免蛋白质污染
2. 试剂选择：丙烯酰胺浓度根据目标蛋白分子量决定（小蛋白用12%，大蛋白用8%）
3. 环境控制：室温超过25℃时建议冰浴操作，防止胶体过早聚合
4. 安全防护：务必佩戴手套，丙烯酰胺单体具有神经毒性

二、胶体配制的黄金比例

掌握这个配方，你就能做出漂亮的电泳胶：

1. 分离胶配制：

   • 30%丙烯酰胺混合液 3.3mL
   • 1.5M Tris-HCl(pH8.8) 2.5mL
   • 10%SDS 0.1mL
   • 10%过硫酸铵 0.1mL
   • TEMED 4μL（最后加入）

2. 浓缩胶配制：

   • 30%丙烯酰胺混合液 0.65mL
   • 1M Tris-HCl(pH6.8) 0.5mL
   • 10%SDS 0.04mL
   • 10%过硫酸铵 0.04mL
   • TEMED 4μL

3. 灌胶技巧：沿玻璃板边缘缓慢注入，避免产生气泡

三、制胶后的质量检验

完美的胶应该具备这些特征：

1. 外观检查：胶体均匀透明无杂质，液面平整无波纹
2. 聚合测试：剩余溶液应在10-15分钟内凝固
3. 保存方法：4℃湿润环境下可保存3天，使用前需平衡至室温
4. 异常处理：出现不聚合时检查TEMED活性，分层现象需重新混匀溶液

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