PI染液配制全攻略

一、PI染液的核心成分

：从粉末到溶液的蜕变PI染液的核心是碘化丙锭（Propidium Iodide），这种红色荧光染料能穿透破损的细胞膜，与DNA结合后发出明亮红光，常用于细胞周期分析、凋亡检测等实验。配制时需准备：

1. PI粉末：纯度需≥95%，避免杂质干扰实验结果

2. 缓冲液：常用PBS（磷酸盐缓冲液）或生理盐水，pH值控制在7.2-7.

3. 辅助试剂：部分实验需添加Triton X-100（0.1%）增加细胞膜通透性> 小贴士：PI对光敏感，配制全程需在暗处操作，建议使用棕色瓶避光保存。

二、配制步骤：精准称量+科学混合

1. 称量粉末：用精密天平称取1mg PI粉末（若需其他浓度，按比例调整）

2. 溶解缓冲液：取10mL PBS缓冲液，预热至37℃（促进溶解）

3. 混合搅拌：将PI粉末缓慢加入PBS中，边加边搅拌至完全溶解

4. 过滤除菌：用0.22μm滤膜过滤溶液，去除可能存在的细菌或颗粒

5. 分装保存：将滤液分装至1.5mL离心管中，每管1mL，-20℃避光保存> 关键点：配制后的PI浓度为100μg/mL，实验时需根据需求稀释（如细胞周期分析常用50μg/mL）。

三、避坑指南：这些错误让你实验白做！

1. 浓度偏差：PI浓度过高会导致背景荧光过强，过低则信号太弱。建议首次配制时用紫外分光光度计检测吸光度（260nm处吸光度值应与浓度匹配）。

2. 污染问题：未过滤的PI溶液可能含细菌，导致细胞死亡或数据异常。务必严格过滤并使用无菌操作台。

3. 保存不当：PI溶液在4℃仅能保存1周，长期使用需分装后-20℃冷冻。反复冻融会降低活性，建议按单次用量分装。

4. 兼容性：PI与某些固定剂（如甲醛）可能发生反应，需在固定细胞后再染色，避免提前混合。> 实验趣闻：某实验室曾因未过滤PI溶液，导致所有细胞检测结果异常，最终发现是滤膜堵塞未更换所致！

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