高分子量WB选胶指南

一、分离胶浓度选择

高分子量蛋白质（>150kDa）需要低浓度凝胶（6-8%）提供更大孔径。就像筛沙子用粗筛网：

• 200-300kDa：推荐6%分离胶

• 100-200kDa：7-8%效果更佳

• 注意：低浓度胶凝固时间需延长20%

二、特殊添加剂应用

常规SDS-PAGE可能卡住超大分子，试试这些"润滑剂"：

1. 尿素梯度：4-6M尿素可解开蛋白聚集体

2. 混合胶系统：上层8%+下层6%的阶梯胶设计

3. 低温电泳：4℃环境减少蛋白缠绕

三、转印方案优化

大分子转印需要"慢工出细活"：

• 采用0.2μm PVDF膜（截留效率提升30%）

• 湿转法：200mA恒流16小时比快速转印效果好

• 添加0.1%SDS到转印缓冲液帮助蛋白解离

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