96孔板MTT细胞铺板全攻略

一、实验前的“装备检查”铺板前先做个“装备清单”：细胞计数板、移液器（10μl和100μl各一支）、96孔板、培养基、PBS、MTT溶液（5mg/ml）、DMSO。细胞状态是关键，建议用对数生长期的细胞，活力高、贴壁快。细胞消化别过度，用胰酶处理1-2分钟，看到细胞开始变圆就终止，轻轻吹打成单细胞悬液。计数时记得稀释倍数，比如10μl细胞+90μl台盼蓝，取10μl加到计数板，四个大方格的细胞数除以4，再乘以10⁴（稀释倍数10×1000=10⁴），就是每毫升的细胞数。## 二、铺板的“黄金比例”铺板核心是控制细胞密度。以常见的2000细胞/孔为例：取计算好的细胞悬液，用培养基稀释到目标浓度（比如2000细胞/100μl=2×10⁴细胞/ml）。每孔加100μl细胞悬液，边缘孔容易蒸发，建议加PBS或培养基“保湿”。铺板时移液器要垂直，枪头贴壁缓慢释放液体，避免产生气泡。加完样后轻轻晃动96孔板，让细胞分布均匀，然后放入37℃、5% CO₂培养箱，静置4-6小时让细胞贴壁。## 三、MTT检测的“时间密码”细胞贴壁后，根据实验设计培养相应时间（比如24、48或72小时）。到时间后，每孔加10μl MTT溶液（终浓度0.5mg/ml），继续培养4小时。这时会看到紫色结晶（甲瓒）形成，用移液器吸掉上清，每孔加100μl DMSO，室温震荡10分钟让结晶充分溶解。最后用酶标仪测490nm或570nm波长的OD值，OD值越高，细胞活力越强。注意：DMSO有毒，操作时戴手套；溶解结晶时避免光照，防止降解。

爱采购产品库海量丰富，能让您快速高效锁定心仪产品，各位商家老板别再犹豫，赶紧体验起来！