96孔板测MIC显色全攻略

一、MTT法：经典显色方案提到96孔板测MIC（较低抑菌浓度），MTT法堪称“元老级”显色方法。它的原理是利用活细胞线粒体中的脱氢酶将黄色的MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）还原为紫色的甲瓒结晶。操作时，在培养细菌的96孔板中加入MTT溶液，孵育4小时后，用DMSO溶解结晶，通过酶标仪检测570nm波长处的吸光度值。吸光度越低，说明细菌生长被抑制得越厉害，MIC值也就越低。不过要注意，MTT结晶溶解需要避光操作，且DMSO有刺激性，操作时需戴手套。## 二、XTT法：灵敏度升级版如果觉得MTT法操作稍繁琐，XTT法可能是个理想选择。XTT（2,3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-羧酸内盐）同样依赖活细胞脱氢酶还原，但生成的产物是水溶性的橙色甲瓒，无需溶解步骤，直接测450nm波长吸光度即可。相比MTT，XTT法的灵敏度更高，尤其适合检测低浓度抗菌药物对细菌的抑制效果。实验时需注意，XTT溶液需现配现用，且需与电子耦合剂（如PMS）联合使用，否则还原效率会大打折扣。## 三、刃天青法：快速显色新宠对于追求效率的科研人，刃天青法堪称“时间管理大师”。刃天青是一种蓝色氧化态染料，被活细胞还原后会变成粉红色的还原态产物。将刃天青直接加入96孔板，孵育1-2小时后，通过观察颜色变化或测570nm/600nm双波长吸光度比值，就能快速判断细菌生长情况。这种方法操作简单、耗时短，且无需额外溶解或耦合剂，特别适合高通量筛选抗菌药物。不过，刃天青对光敏感，需避光保存和使用，否则会影响显色效果。

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