电泳配胶全攻略：手残党也能学会

一、配胶前的准备：工具与材料清单配胶就像做蛋糕，材料不对全白费！先准备好这些「厨房用具」：1. 核心材料：丙烯酰胺（Acrylamide）、甲叉双丙烯酰胺（Bis）、TEMED（加速剂）、过硫酸铵（APS）、Tris缓冲液、SDS（十二烷基硫酸钠）2. 工具套装：电子天平（精确到0.01g）、磁力搅拌器、烧杯（50ml/100ml）、量筒（10ml/25ml）、移液枪（100μl-1000μl）、凝胶模具（根据板子大小选）3. 安全装备：实验服、手套、护目镜（丙烯酰胺有毒！接触皮肤会引发过敏）小技巧：配胶前用去离子水清洗所有工具，避免杂质影响凝胶质量。APS要现用现配，放久了会失效。## 二、配胶黄金比例：分离胶与浓缩胶的秘密配胶的核心是比例，就像调鸡尾酒一样讲究！以1.5mm厚度的10孔胶板为例：### 分离胶（下层胶，决定分离效果）| 成分 | 10ml体系用量 | 作用 ||------------|--------------|--------------------------|| 30%丙烯酰胺 | 3.3ml | 形成凝胶骨架 || 1.5M Tris | 2.5ml | 维持pH稳定 || 10% SDS | 0.1ml | 消除蛋白电荷差异 || 10% APS | 0.1ml | 引发聚合反应 || TEMED | 0.004ml | 加速聚合（几滴就够了！） || 去离子水 | 4.0ml | 调节总体积 |操作要点：先混合除APS和TEMED外的所有成分，最后加引发剂，灌胶后用异丙醇压平液面。### 浓缩胶（上层胶，聚焦蛋白）| 成分 | 5ml体系用量 | 作用 ||------------|-------------|----------------------|| 30%丙烯酰胺 | 0.83ml | 形成致密网状结构 || 1.0M Tris | 0.63ml | 创造浓缩环境 || 10% SDS | 0.05ml | 保持蛋白解离状态 || 10% APS | 0.05ml | 引发二次聚合 || TEMED | 0.005ml | 加速反应（真的只要一滴！）|| 去离子水 | 3.44ml | 调节浓度 |操作要点：分离胶凝固后（约30分钟），倒掉异丙醇，用滤纸吸干残留液体，再灌浓缩胶，立即插入梳子。## 三、避坑指南：新手常犯的5个错误1. 比例失调：丙烯酰胺浓度过高会导致凝胶脆裂，过低则分离效果差。建议用移液枪精确量取，避免「目测法」。2. TEMED过量：加太多会让凝胶凝固过快，来不及灌胶就变成「果冻」。记住：分离胶加4μl，浓缩胶加5μl足够！3. 气泡陷阱：灌胶时速度太慢或搅拌不充分会产生气泡，影响电泳条带。可以用注射器沿玻璃板边缘缓慢注入。4. 温度失控：夏天在空调房配胶，冬天用温水浴预热试剂（37℃最佳），温度过高或过低都会影响聚合速度。5. 梳子拔太早：浓缩胶未完全凝固就拔梳子，会导致胶孔变形。耐心等15-20分钟，用手轻按胶面不凹陷再操作。理想技巧：配好的凝胶可以4℃保存1-2天，但APS和TEMED要现用现加，否则凝胶会提前聚合！

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