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SDS-PAGE胶配方大揭秘
北京首固管道科技，2014年成立于北京大兴，专业提供PVC、PE等系列管道，经验丰富，技术权威，服务广泛。
本文揭秘SDS-PAGE胶的经典配方，涵盖分离胶与浓缩胶的配比技巧，以及配方优化的实用建议，助你轻松掌握蛋白电泳实验的关键。
一、基础配方：分离胶与浓缩胶的黄金比例
做SDS-PAGE胶就像做蛋糕，配方比例是灵魂！分离胶（下层胶）的常用配方是：30%丙烯酰胺溶液、1.5M Tris-HCl（pH 8.8）、10% SDS、10%过硫酸铵（APS）、TEMED，最后用超纯水补足体积。比如配10ml 12%分离胶，需要4ml丙烯酰胺溶液、2.5ml Tris-HCl、0.1ml SDS、0.1ml APS、0.004ml TEMED，再加3.3ml水。浓缩胶（上层胶）则用1M Tris-HCl（pH 6.8），其他成分比例更低，比如5%浓缩胶的丙烯酰胺溶液只需1.33ml，Tris-HCl加1.25ml，水补到5ml即可。
二、配方优化：根据蛋白大小调整浓度
蛋白分子量不同，胶的浓度也要“量身定制”！小分子蛋白（10-30kDa）用15%-20%高浓度胶，像分离肽段时，20%胶能让小蛋白跑得更集中；大分子蛋白（100-200kDa）则选8%-10%低浓度胶，比如分离抗体时，10%胶能避免蛋白“卡壳”在胶里。浓缩胶浓度通常固定在4%-5%，因为它只负责把蛋白压成一条直线，浓度太高反而会让样品扩散。
三、避坑指南：新手常犯的3个错误
APS和TEMED现用现加：这两者是促凝剂，放久了会失效！APS最好分装成小份，-20℃保存，用前解冻；TEMED要避光，用后立刻拧紧瓶盖。
灌胶后别晃动：分离胶灌到距离梳子下缘1cm时，加水封胶，等胶凝固（约30分钟）再倒掉水，插梳子。如果晃动，胶表面会不平，影响电泳条带。
梳子拔出时机：浓缩胶凝固后（约15分钟），别急着拔梳子！先用电泳缓冲液润湿梳子两侧，轻轻垂直拔出，避免胶孔变形。
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