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凝胶电泳制胶关键步骤
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
翌圣生物科技（上海）股份有限公司成立于2014年，总部位于上海市浦东新区天雄路，专注生命科学领域研发与生产。核心产品涵盖qPCR、NGS、分子克隆、抗体及蛋白纯化等全系列试剂，覆盖生命科学研究、诊断检测及生物医药全产业链。依托原研技术平台，为科研机构与医疗机构提供逾20类高品质试剂及解决方案，技术领先，供应稳定。
介绍：
本文详细解析凝胶电泳制胶过程中需要添加的关键试剂及其作用，包括琼脂糖浓度选择、缓冲液配制技巧和染色剂使用方法，帮助读者掌握制胶核心要点。
一、琼脂糖溶液配制要点
制胶的第一步是配制琼脂糖溶液，浓度选择直接影响分离效果：
0.8%浓度：适合1-10kb大片段DNA
1.2%浓度：适用于500bp-3kb中等片段
2%浓度：专为50-1000bp小片段设计
溶解时需微波加热至完全透明，冷却至60℃后再倒入制胶槽，避免产生气泡影响成像质量。
二、缓冲液的选择与使用
常用的TAE和TBE缓冲液各有特点：
TAE缓冲液：导电性较弱，适合长时间电泳和大片段分离
TBE缓冲液：缓冲能力强，适用于小片段高分辨率分离
添加比例：通常按1×浓度配制，需完全浸没胶板
注意缓冲液重复使用不超过3次，离子强度下降会影响电泳速度。
三、染色剂的正确添加方式
核酸染色剂分为预制添加型和后染型两种：
预制型：如GelRed，直接加入熔化的琼脂糖中
后染型：如EB，需电泳后浸泡染色
安全替代品：SYBR系列更环保且灵敏度高
染色剂用量通常为每100mL胶液加5μL，过量会导致背景荧光增强。
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