实验室制胶操作步骤

很多新手在实验室第一次配胶时，不是气泡满天飞就是跑出来的条带歪歪扭扭，其实核心就卡在“除气”和“赶水”这两个动作上。只要掌握了标准的操作流程和几个关键的自检判据，就能轻松搞定。

一、准备阶段：精确配制溶液并彻底除气

制胶的第一步是配制分离胶溶液。准确量取丙烯酰胺母液、缓冲液、10% SDS以及去离子水混合均匀后，判据：加入TEMED前务必观察溶液状态，必须澄清透明、无微小气泡，若发现气泡需静置或短暂离心处理。接着，按每10ml溶液加入10μl TEMED的比例快速混匀。判据：此时溶液应立即产生白色泡沫状反应，若反应迟缓说明试剂失效或比例错误，需重新配制。将配好的分离胶溶液沿玻璃板缝隙缓慢注入，注意不要产生气泡，注胶高度距梳子底部约0.5-1cm处停止。随后轻轻覆盖一层去离子水或异丙醇进行封层。

二、灌注阶段：分离胶聚合后小心去除封层液

等待约30分钟，待分离胶完全凝固。判据：用手指轻触胶面，感觉有阻力且平整不粘手，即表示聚合完成。倒掉覆盖的封层液，用滤纸小心吸干残留液体，注意不要触碰胶面。判据：若胶面出现波浪状或不平整，说明吸水不均或操作过猛，需用滤纸垂直轻压吸干。接着配制浓缩胶溶液，同样加入TEMED混匀后立即注入。判据：注入速度要快，避免空气卷入。迅速垂直插入梳子，确保梳齿完全没入胶液中且不接触分离胶表面。

三、固化与测试：等待凝固并进行预电泳

让浓缩胶在室温下静置聚合约20-30分钟。判据：拔起梳子时，加样孔应边缘清晰、无破损，若孔壁塌陷说明时间不足或胶体太稀。将凝胶槽安装好，注入电泳缓冲液。判据：先以恒压50V进行预电泳10-15分钟，观察指示灯电流是否稳定且无异常发热，同时检查指示剂先进是否平直移动。确认无误后，即可开始正式的上样与电泳实验。

📌总的来说，记住“溶液除气要彻底、封层吸水别碰胶、拔梳慢稳保孔型”这一句就够了，按部就班就能一次成功。

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