概述
WST-2是第二代水溶性四唑盐类细胞活性检测试剂，由日本同仁化学研究所开发。在细胞生物学实验室工作多年的技术人员普遍反映，相比传统MTT法，WST-2最大的优势是省去了溶解甲臜结晶的有机溶剂萃取步骤。 其工作原理是通过活细胞线粒体脱氢酶将四唑盐还原为水溶性甲臜染料，颜色深浅与活细胞数量成正比。这种检测方法已成为药物筛选、癌症研究和免疫学实验的黄金标准，特别是在96/384孔板的高通量筛选中应用广泛。
物理化学性质
WST-2分子结构中含有两个磺酸基团，使其具有极佳的水溶性（>10mg/mL）。反应产物在450nm处有最大吸收峰，与培养基的酚红指示剂（560nm）无光谱重叠，减少了检测干扰。 与第一代MTT相比，WST-2的还原电位更低（约-0.4V vs NHE），能被更广泛的脱氢酶还原。实验数据显示，其检测灵敏度比MTT高30-50%，线性范围可达3个数量级（5×10^2-5×10^5 cells/well）。
主要用途
在抗癌药物筛选中，WST-2可用于评估化合物对肿瘤细胞的IC50值，约占该类实验用量的60%。免疫学研究用它测定淋巴细胞增殖反应，如混合淋巴细胞反应(MLR)和抗原特异性T细胞活化实验。 微生物领域应用于细菌/真菌活力检测，特别是在抗生素敏感性测试中。近年来还开发出用于3D细胞球和类器官活力评估的特殊配方，这类应用年增长率超过15%。
安全与储存
虽然WST-2本身毒性较低（LD50>2000mg/kg），但还原产物可能具有致突变性。实验室操作建议在生物安全柜中进行，废液需用10%次氯酸钠处理后再排放。 储存时需严格防潮，开封后建议分装使用。冻干粉在-20°C下可稳定保存2年，配制成工作液后4°C保存不超过1周。避免反复冻融，解冻后若出现沉淀应弃用。
B2B采购指南
优质WST-2应满足：含水量<1%、重金属含量<10ppm、450nm处空白吸光度<0.1（1mg/mL水溶液）。工业采购时建议要求供应商提供HPLC纯度证明（应≥98%）和细胞检测验证报告。 国际品牌如Dojindo、Sigma价格较高（约500元/10mg），国产试剂如碧云天、索莱宝性价比更优（约200-300元/10mg）。大批量采购（>100g）可议价至150-180元/10mg。
常见问题
WST-2和CCK-8有什么区别？
CCK-8是WST-8与电子耦合剂的预混试剂，灵敏度更高但成本贵3-5倍。WST-2需自行优化检测条件，更适合预算有限的常规实验。
反应后溶液出现沉淀怎么办？
通常是pH异常或血清蛋白干扰所致。建议检测前更换无血清培养基，确保反应体系pH为7.0-7.4，必要时可离心取上清检测。
如何延长显色稳定性？
加入10mM HEPES缓冲液(pH7.4)可使显色稳定4-6小时。避免强光直射，检测间隔可将板子置于暗盒中保存。
最适合的检测波长是多少？
建议双波长检测（450nm测试波长，630nm参考波长），可消除培养基浑浊和板间差异的干扰。
细胞接种密度如何确定？
需预实验确定：通常肿瘤细胞5000/孔，原代细胞10000-20000/孔。反应后OD值在0.8-1.2区间线性最佳。
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