概述
磺化Cy5琥珀酰亚胺是Cy5荧光染料的磺化衍生物，属于花菁素类荧光标记试剂。经过十多年实验室验证，其优异的稳定性和水溶性使其成为生物共价标记的首选之一。 与普通Cy5相比，分子中的磺酸基团使其水溶性大幅提高，无需有机溶剂助溶即可直接用于水性体系标记。NHS酯基（N-羟基琥珀酰亚胺酯）能特异性与蛋白质、多肽、氨基修饰核酸等生物分子的伯胺基团形成稳定酰胺键。
物理化学性质
该化合物的最大激发波长约650nm，发射波长约670nm，恰好处于生物组织光学窗口（650-900nm），能有效减少生物样本的自发荧光干扰。摩尔消光系数高达约250,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹，荧光量子产率约0.28。 磺酸基团的引入使水溶性显著提升（>10 mg/mL），同时保持了良好的光稳定性。在pH 7-9的缓冲体系中活性最高，标记反应通常在此条件下进行2-4小时即可完成。
主要用途
在蛋白质组学研究中，常用于抗体标记用于Western blotting检测，灵敏度可比常规ECL法提高10-100倍。流式细胞术中单个细胞表面可检测到约1000个荧光分子，适合低丰度抗原分析。 核酸标记方面，主要用于氨基修饰的DNA/RNA探针标记，应用于荧光原位杂交（FISH）和实时PCR检测。在活体成像中，因其近红外荧光特性可用于小动物体内肿瘤靶向示踪。
安全与储存
虽然毒性较低（LD50>500 mg/kg），但粉末可能引起呼吸道刺激，建议在通风橱中操作。冻干粉在-20℃避光干燥条件下可稳定保存2年，但配制成溶液后应在1周内使用完毕。 标记反应后的纯化建议使用脱盐柱或透析法去除游离染料。废液处理应参照有机染料废弃物标准，不可直接排入下水道。
B2B采购指南
采购时需重点关注纯度（HPLC≥95%）、游离染料含量（应<5%）、水分含量（需<1%）等指标。不同批次的染料可能因合成工艺差异导致标记效率波动，建议先购买小样测试。 国际品牌如Lumiprobe、Click Chemistry Tools质量稳定但价格较高，国产试剂如翌圣生物等性价比更优。对于长期实验，推荐购买100mg大包装以降低单次使用成本。
常见问题
标记效率低怎么办？
可尝试提高反应物摩尔比（染料:蛋白=10:1）、延长反应时间至4小时、使用pH 8.5的碳酸盐缓冲液优化反应条件。
如何计算染料-蛋白结合比？
通过测量280nm（蛋白）和650nm（染料）吸光度，按公式：（A650/ε650）/((A280-0.05×A650)/εprotein)计算。
标记后荧光减弱快？
可能是储存条件不当导致，建议标记物分装后-80℃保存，避免反复冻融和光照。添加5%甘油可提高稳定性。
适合标记哪些生物分子？
最佳标记对象是含伯胺基团的分子，如蛋白质的赖氨酸残基、氨基修饰的DNA/RNA、含氨基的纳米材料等。
与普通Cy5-NHS有什么区别？
磺化Cy5水溶性更好，可直接用于水相标记；普通Cy5-NHS需先用DMSO溶解再稀释，可能影响某些敏感蛋白的活性。
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