概述
小鼠泛素是一种由76个氨基酸组成的保守小分子蛋白,在真核细胞中普遍存在。实验室中经常使用重组表达的小鼠泛素进行各种分子生物学实验。 泛素系统是细胞内最重要的蛋白质降解途径之一,通过泛素-蛋白酶体系统选择性降解靶蛋白。这一过程不仅调控蛋白质周转,还参与细胞周期、DNA修复、免疫应答等多种生理过程。在神经退行性疾病和癌症研究中具有重要价值。
物理化学性质
小鼠泛素分子量约8.5kDa,等电点约6.7,在生理pH条件下带微弱负电。其结构高度保守,与人类泛素有96%的同源性,核心的β-折叠桶结构非常稳定。 在SDS-PAGE中通常显示为8-10kDa的单一条带,实际分子量略小于表观分子量。冻干粉末可长期保存,溶解后建议分装冻存以避免反复冻融导致的聚集。在pH4-10范围内稳定性良好。
主要用途
小鼠泛素主要用于泛素化相关研究:1)体外泛素化反应系统组建,研究E1/E2/E3酶的活性;2)蛋白质降解机制研究,如构建泛素-蛋白酶体系统;3)作为阳性对照用于Western blot等检测。 在药物筛选中,泛素系统是重要的靶点,特别是针对癌症和神经退行性疾病的药物开发。也有研究将其用于蛋白质纯化标签,通过泛素特异性蛋白酶切除获得天然N端的重组蛋白。
安全与储存
小鼠泛素本身无显著毒性,但实验操作中仍需采取标准防护措施。冻干粉末易吸潮,开封后应尽快使用并密封保存。溶解后若出现浑浊,可离心去除不溶物。 长期储存建议分装冻存于-80℃,避免反复冻融。运输通常在干冰条件下进行。若溶液出现沉淀或降解,可通过SDS-PAGE检测完整性。实验室常用浓度为0.1-1mg/mL。
B2B采购指南
采购时需重点关注:1)纯度(HPLC≥95%);2)内毒素水平(<0.1EU/μg);3)是否有活性验证数据;4)是否提供质谱和HPLC分析报告。 知名品牌如Sigma、R&D Systems、Abcam等质量较有保障,但价格较高。国产品牌性价比更优,建议索取小样测试。大批量采购可协商价格,通常100μg包装约500-1500元,1mg约3000-8000元。
常见问题
小鼠和人类泛素可以互换使用吗?
在大多数实验中可以互换,因其序列高度保守。但某些特异性抗体或酶可能对物种差异敏感,需先行验证。
如何检测泛素活性?
常用方法包括体外泛素化实验(需E1/E2/E3酶)、蛋白酶体降解实验,或通过Western blot检测多泛素链形成。
泛素溶液出现沉淀怎么办?
可尝试短暂超声或离心去除不溶物。如降解严重需更换新批次,储存时避免反复冻融。
为什么我的Western blot中泛素条带不单一?
可能原因:1)样本中游离泛素和多泛素链共存;2)二聚体形成;3)降解产物。建议优化电泳条件和抗体稀释度。
如何选择泛素突变体?
K48R用于研究蛋白酶体降解,K63R用于研究非降解功能,K0(所有Lys突变)用于研究单泛素化。
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