概述
感受态细胞试剂是分子生物学实验中的关键试剂,主要用于将外源DNA导入宿主细胞。长期从事基因克隆的研究人员深知,高质量的感受态细胞可以显著提高转化效率,减少实验失败率。 这类试剂通过改变细胞膜的通透性,使细胞处于感受态,从而更容易吸收外源DNA。常见的感受态细胞包括大肠杆菌(E. coli)和酵母等,其中大肠杆菌感受态细胞应用最为广泛。市场上有多种商业化产品,转化效率从10^6到10^9 cfu/μg DNA不等。
物理化学性质
感受态细胞试剂通常含有钙离子、镁离子等二价阳离子,这些离子能够中和DNA的负电荷,减少细胞膜与DNA之间的静电排斥。实验室经验表明,试剂中的这些成分对转化效率有直接影响。 此外,试剂中还可能含有还原剂(如DTT)和渗透压调节剂(如蔗糖或甘油),这些成分能够进一步改变细胞膜的结构和通透性。冻干型试剂通常在-20℃下可保存较长时间,而液体型试剂则需要-80℃保存以避免活性降低。
主要用途
感受态细胞试剂主要用于分子克隆实验,包括质粒构建、基因文库构建和定点突变等。在基因工程领域,约80%的实验需要用到感受态细胞。 此外,在蛋白表达研究中,感受态细胞也用于转化表达载体。不同菌株的感受态细胞适用于不同实验需求,如DH5α适合质粒克隆,BL21(DE3)适合蛋白表达。转化效率是选择感受态细胞的重要指标,高效感受态细胞(>10^8 cfu/μg)适用于珍贵样本或低拷贝数质粒。
安全与储存
感受态细胞试剂通常对环境影响较小,但仍需按生物试剂规范处理。实验操作时应避免试剂直接接触皮肤和眼睛,若不慎接触,需立即用大量清水冲洗。 储存方面,冻干粉需-20℃保存,液体试剂需-80℃保存。反复冻融会显著降低转化效率,因此建议分装使用。商业化产品通常标有明确的保存期限,但实验室自制的感受态细胞最好在1-2周内使用完毕。
B2B采购指南
采购感受态细胞试剂时,需首先明确实验需求。对于常规克隆,10^7 cfu/μg的转化效率已足够;而对于珍贵样本或低拷贝数质粒,建议选择高效感受态细胞(>10^8 cfu/μg)。 价格受菌株类型、转化效率和包装规格影响较大。常见品牌如NEB、Thermo Fisher、Takara等质量稳定但价格较高,国产试剂如天根、全式金等性价比更优。建议根据实验需求选择合适的规格,避免浪费。
常见问题
感受态细胞可以自制吗?
可以,实验室常用CaCl2法制备感受态细胞,但转化效率通常低于商业化产品,且保存时间较短,适合对转化效率要求不高的常规实验。
感受态细胞的转化效率如何测定?
通常使用已知浓度的质粒DNA(如pUC19)进行转化,然后计算每微克DNA产生的菌落数(cfu/μg DNA)。商业化产品会提供该数据。
感受态细胞可以反复冻融吗?
不建议。反复冻融会显著降低转化效率。最好分装使用,每次取用后立即放回超低温冰箱。
不同菌株的感受态细胞有什么区别?
不同菌株适用于不同实验。DH5α适合质粒克隆,BL21(DE3)适合蛋白表达,TOP10适合高拷贝数质粒。选择时需根据实验需求确定。
感受态细胞转化失败可能的原因?
可能原因包括:感受态细胞活性降低、质粒DNA质量差、热激条件不当(温度或时间不准确)、抗生素浓度不正确等。建议系统排查各环节。
相关厂家
- 主营:生化试剂
- 主营:胆固醇荧光探针、罗丹明B酰肼、深红溶酶体荧光探针、缺氧探针、鬼笔环肽、钙黄绿素红、钙螯合剂
- 主营:elisa试剂盒、生物试剂、荧光试剂盒、化学试剂、比色法试剂盒、抗体、培养基、标准品
- 主营:耗材、仪器、实验耗材、试剂、转染试剂、takara试剂、qiagen试剂盒、zymo试剂盒、EZB试剂盒、细胞核悬液制备试剂盒、解离试剂盒、origene蛋白、CST抗体、abcam抗体、permagen磁力、polyplus转染、AcceGen细胞、goldbio荧光素、Toxin肠毒素、速溶颗粒、DMEM培养基、胎牛血清、alzet渗透泵、伊莱瑞特、millipore
- 主营:清洗液、裂解液、保存液、试剂盒、提取试剂、感受态细胞、青霉素、稀释液、清除剂、显色液、抑制剂、转膜液、核酸染料、脱脂奶粉、预染蛋白、快速封闭液、牛血清白蛋白、特级胎牛血清、水浴锅抑菌剂、蛋白上样缓冲液、胰蛋白酶消化液、快速蛋白染色液
- 主营:化学试剂、分析试剂、标准试剂、实验试剂
- 主营:人ELISA试剂盒、大鼠ELISA试剂盒、生化法检测试剂盒、分子学检测试剂盒、植物ELISA试剂盒、鱼ELISA试剂盒
- 主营:蛋白与免疫、ELISA、微生物培养、生化试剂、生化试剂盒、染色试剂、磁珠、纳米材料、抗体
- 主营:化学感受态细胞、医用冷藏箱
- 主营:叔丁酯、银杏叶、灭菌磷、感受态细胞、檀香醇、磺酰基、庚烯酮、分散蓝、异丁酯、乙霉威、霜霉威、3681-82-1、水中氟、子烯酮、野菊花、西洋参、氟苯基、芫根苷、甲氨基、唑螨酯、洋艾素、denhardts、水中钙、独活素、苯基芴、水中钡
- 主营:离心管、聚酯膜、培养瓶、处理微孔板、细胞培养板、聚碳酸酯膜、外旋冻存管、内旋冻存管、细胞培养皿、超低吸附微孔板
- 主营:测量仪、合成仪、真空泵、转染试剂、生物墨水、打印设备、成像系统、表型分析、表面改性、气流控制阀、等离子剥离、搅拌去泡机、生物打印机、分光光度计、植物扫描仪、动物呼吸鼻套、表面处理系统、搅拌脱泡装置、气相沉积系统、生物细胞打印、高速打印细胞、蒸汽灌注系统、真空固化系统、蒸汽预处理系统、核磁共振波谱仪
- 主营:氧化铈、氧化镧、硝酸铈铵、高纯碳酸铈、硫酸高铈、硫酸铈、大粒径碳酸铈、低氯根碳酸铈、氢氧化铈
- 主营:硫酸铜、凡士林、碘化钾、硫酸铵、二甲苯、钼酸铵、正庚烷、正丁醇、水杨酸、石油醚、乙二醇、硅酸钠、环己烷、异辛烷、苯甲酸、草酸铵、环己酮、硫酸镁、蓖麻油、正己烷、活性炭、溶剂油、草酸钠、二氯甲烷、乙酸乙酯
- 主营:氯化镧、锆产品、钴产品、稀土盐类
- 主营:淬火剂、丁二烯、二甲苯、丁二烯试剂出售、异丁烯、外皮套、化冰剂、黏结剂、实验室、丁腈胶乳、丁苯胶乳、丁苯橡胶、压力钢瓶、印染助剂、有机溶剂、合成橡胶、改性材料、合成树脂、丁基橡胶、异戊橡胶、顺丁橡胶、丙烯腈桶、异戊二烯、工程塑料、乙酰丙酸、铝合金瓶
- 主营:标准品、DRE
- 主营:防冻液、食用酒精、141B发泡剂、洗网水、LG异丙醇、二氯甲烷、除胶剂、洗枪水、二乙醇胺、甘油、脱膝剂、丙三醇、三乙醇胺、二甲基乙酰胺、增塑剂DOP、聚氨酯发泡剂、工业酒精、化白水、PMA、丙二醇、白油、清洗剂、二甲苯、无水乙醇、去渍油
- 主营:磷酸三甲苯酯、氨基甲酸乙酯、磷酸甲苯二苯酯、化学分析试剂、甲乙酮肟、四乙基溴化铵、碳酸二丁酯、环烷酸铅、亚硫酸铵、二苯甲酮腙、石油磺酸钠、三乙醇胺、甲醇、乙醇、二甲苯、二氯甲烷、环烷酸铜、氨基甲酸甲酯、单过硫酸氢钾、氯化石蜡、三异丙醇胺、苄基三甲基氯化铵、苄基三乙基氯化铵、四乙基氯化铵、四甲基氯化铵、新癸酸铋
- 主营:尿素溶液、防霉食品添加剂、次氯酸钠、重氮化试剂、食用葡萄糖、聚丙烯酰胺、五水偏硅酸钠、工业级硫酸铜、工业碳酸钠、盐酸、氯化氢水溶液、纸浆漂白剂、工业级氢氧化钙、消石灰、漂白粉
- 主营:打压机、试漏机、增压泵、报警阀、检测仪、倒水机、实验机、测试台、安全阀、加压泵、测试仪、试验机、胀管机、储气瓶、灌装泵、试验台、调校仪、增压装置、组合开关、超高压泵、胀接设备、充气装置、测试系统、检测设备、泄露检测
- 主营:对照品、标准品
- 主营:聚维酮、吗啉、乙二醇丁醚、聚乙烯吡咯烷酮、甲基异丙基酮、甲基吡咯烷酮、三乙醇胺硼酸酯、甲基叔丁基醚、正戊烷、三元酸、邻氯苯甲酰氯、司盘、吐温、松节油、环氧树脂、苯甲醇、二异丁基酮、二甲基乙酰胺、乙烯基吡咯烷酮
- 主营:120号溶剂油、航空煤油、异构十二烷、260号溶剂油、二氯甲烷、三氯乙烯、四氯乙烯、正十四烷、甲基丙烯酸缩水甘油酯、丙烯酸、碳酸二甲酯、60号全精炼石蜡、顺酐、苯酐、80号微晶蜡、甲基苯骈三氮唑、甲基丙烯酸、二月桂酸二丁基锡、精萘、硫脲、二茂铁、莫卡、邻苯二甲酸二辛酯、抗氧剂BHT501、亚磷酸
- 主营:氯化钾、柠檬酸铵、柠檬酸氢二铵、柠檬酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾、乙酸铵、乙酸钠、醋酸铵、醋酸钠、乙酸钾、草酸铵、醋酸钾、硫酸镁、硫酸锌、甲酸铵、尿素、草酸铜、草酸钾、硫酸锰、硫酸钠、硫酸铵、磷酸氢镁
- 主营:酶联免疫试剂盒、elisa试剂盒、pcr试剂盒、核酸试剂盒、抗体
