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细胞dna提取试剂盒

更新时间:2026-07-06

概述

细胞DNA提取试剂盒是现代分子生物学实验室的常规耗材,其核心原理是利用硅胶膜特异性吸附DNA的特性。十年实验室经验表明,相比传统的酚氯仿提取法,试剂盒操作时间可缩短60%以上,且避免了有毒有机溶剂的使用。 主流产品通常基于离心柱技术,包含裂解液、蛋白酶K、洗涤缓冲液和洗脱液等组分。根据样本类型不同,可分为血液DNA提取试剂盒、组织DNA提取试剂盒和通用型试剂盒三大类。国际知名品牌如Qiagen、Thermo Fisher的市场占有率合计超过50%。

物理化学性质

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试剂盒中的裂解液通常含SDS或CTAB等去污剂,能有效破坏细胞膜和核膜。蛋白酶K的工作浓度约0.1-1mg/mL,最适作用温度为56℃,能消化蛋白质杂质。 结合缓冲液含高浓度离液盐(如盐酸胍),可使DNA与硅胶膜高效结合。洗涤液通常含乙醇或异丙醇,能去除残留的蛋白质和盐分而不洗脱DNA。最终洗脱液多为Tris-EDTA缓冲液(pH8.0),保持DNA稳定。

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主要用途

在临床诊断中,用于从外周血白细胞提取DNA进行遗传病检测,单个试剂盒可处理100-200个样本。科研领域常用于细胞培养物的基因组提取,每个样本通常需要5×10^6个细胞。 特殊设计的试剂盒可处理困难样本,如福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织,这类产品通常含特殊去交联剂。近年来,自动化工作站兼容的96孔板形式试剂盒需求增长迅速,适合大规模基因组研究。

安全与储存

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蛋白酶K溶液需-20℃保存,反复冻融不超过3次。含胍盐的裂解液在低温下可能析出结晶,使用前需37℃温浴至完全溶解。 实验废液应收集在含10%漂白剂的专用容器中处理,避免直接倒入下水道。操作全程需在生物安全柜中进行,特别是处理可能含病原体的临床样本时,需达到BSL-2级防护标准。

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B2B采购指南

采购时需明确样本类型(全血/组织/细胞培养物)、预期得率(1-20μg/10^6细胞)和纯度要求(A260/280比值)。高通量研究建议选择96孔板形式,配套磁珠法的试剂盒更适合自动化平台。 国产品牌如天根、生工等性价比高(约300-800元/50次),进口品牌如Qiagen的DNeasy系列质量稳定但价格较高(约1500-4000元/50次)。大批量采购可争取30-50%的折扣,注意核对货期和冷链运输条件。

常见问题

提取的DNA有降解怎么办?

可能是样本新鲜度问题或操作过于剧烈。建议使用新鲜样本,裂解时轻柔混匀,冰上操作。对陈旧样本可尝试含RNase A的试剂盒。

DNA得率低可能原因?

常见原因包括细胞数量不足、裂解不彻底、洗涤过度或洗脱体积过大。建议优化裂解时间,控制最后洗脱体积在50-100μL。

如何选择离心柱容量?

常规实验选50-100μg容量柱,全基因组测序建议用300μg高容量柱。注意不要超载,否则会影响纯度。

国产和进口试剂盒差异大吗?

基础应用差异不大,但进口产品对困难样本处理更稳定。关键实验建议先做对比测试,常规检测可用国产品牌。

试剂盒过期还能用吗?

蛋白酶K活性会随时间下降,过期试剂盒可能影响得率。其他组分若保存得当,过期3个月内尚可使用,但不建议用于重要实验。

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