概述
人半胱氨酸蛋白酶3是细胞凋亡信号通路中的关键执行者，属于半胱氨酸蛋白酶家族。在临床病理切片分析中，Caspase-3的激活程度常被用作判断细胞凋亡程度的重要标志物。 作为凋亡级联反应中的'刽子手'，它能切割超过200种细胞底物，包括PARP、核纤层蛋白等关键蛋白。其激活标志着细胞进入不可逆的凋亡阶段，在发育、免疫和肿瘤抑制等生理过程中扮演核心角色。
物理化学性质
Caspase-3以32kDa酶原形式存在，激活后裂解为17kDa和12kDa两个亚基形成活性异源二聚体。酶活性中心含有保守的QACRG五肽序列，依赖半胱氨酸残基（Cys163）进行催化。 其最适pH为7.0-7.5，在体外实验中需要2-10mM DTT维持还原环境。酶活性可被广谱抑制剂Z-VAD-FMK特异性抑制，这种特性常被用于确认其功能的研究中。
主要用途
在基础研究中，重组Caspase-3常用于体外切割实验验证底物，或建立细胞凋亡模型。通过荧光底物（如Ac-DEVD-AMC）可定量检测其活性，这是凋亡检测试剂盒的核心原理。 在药物开发领域，Caspase-3激活剂（如PAC-1）和抑制剂都是研究热点。肿瘤治疗中诱导其激活可促进癌细胞凋亡，而在神经退行性疾病中抑制其过度激活可能保护神经元。
安全与储存
重组Caspase-3冻干粉在-80℃可稳定保存1年以上，溶解后建议分装避免反复冻融。活性在4℃仅能维持数小时，长期保存需加入25%甘油。 虽然不属于剧毒物质，但高浓度酶溶液可能引起皮肤刺激。实验室处理时应佩戴手套和护目镜，废弃物需经高压灭菌或蛋白酶处理灭活。
B2B采购指南
科研用重组Caspase-3主要有活性酶和酶原两种形式，供应商包括Sigma、Merck、BioVision等。活性酶价格约2000-5000元/μg，酶原价格低30-50%。 采购时需关注比活性（通常≥2000units/mg）、内毒素水平（<1EU/μg）和载体蛋白（如不含BSA更适合细胞实验）。小包装（1-10μg）适合初筛，批量采购可获更好单价。
常见问题
Caspase-3与细胞坏死有何关系？
传统认为Caspase-3仅参与凋亡，但近年研究发现某些坏死性凋亡（necroptosis）中也检测到其活化。两者关系比想象的更复杂。
如何区分Caspase-3的酶原和活性形式？
可通过Western blot检测，酶原为32kDa条带，活性形式为17kDa和12kDa条带。活性检测需使用特异性荧光底物。
为什么我的Caspase-3活性检测结果不稳定？
可能是DTT浓度不足（建议5mM）、样本反复冻融或检测时间过长（宜在30-60分钟内读数）导致。新鲜制备样本效果最佳。
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