概述
丙烯酰胺/甲叉溶液是分子生物学实验室的常规试剂，由丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺交联剂按特定比例（常见29:1或37.5:1）配制的水溶液。经验丰富的实验员都知道，溶液新鲜程度直接影响电泳结果的可重复性。 这种溶液的核心价值在于能快速配制聚丙烯酰胺凝胶，通过自由基聚合形成具有分子筛效应的三维网络结构。根据浓度不同（5%-20%），可分离不同分子量范围的蛋白质或核酸片段，是Western blot、SDS-PAGE等技术的物质基础。
物理化学性质
丙烯酰胺单体在水中溶解度极高（25℃时215g/100mL），而甲叉双丙烯酰胺溶解度很低（仅0.3g/100mL）。配制溶液形式既保证了交联剂的充分溶解，又确保了使用时的便捷性。 溶液稳定性是关键指标，常温下会缓慢自聚，光照和高温加速这一过程。优质产品会添加0.1-0.5%的抑制剂如N,N'-亚甲基双丙烯酰胺。pH值通常控制在4.0-5.0以延缓聚合，使用前需用Tris缓冲液调节至8.8左右启动聚合反应。
主要用途
主要用于配制不同浓度的分离胶（通常7-15%）和浓缩胶（通常4%）。在SDS-PAGE中，蛋白质在电场作用下按分子量大小分离；在Native-PAGE中则保持天然构象分离。 其次用于DNA测序胶的配制，特别是尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳。在二维电泳中，第一向等电聚焦后的IPG胶条需转移到丙烯酰胺凝胶进行第二向分离。特殊配方还用于制备梯度胶、变性胶等。
安全与储存
丙烯酰胺是确认的神经毒素（可通过皮肤吸收）和2A类可能致癌物。实验室应建立严格的管理制度，包括专用存放冰箱、双人双锁、使用登记等。接触时必须佩戴丁腈手套（普通乳胶手套防护不足）、护目镜和实验服。 储存建议分装避光冷藏，开封后标记日期。出现浑浊或自聚现象应立即废弃。废弃处理需用10%过硫酸铵溶液引发完全聚合后再丢弃，或交由专业危废公司处理。
B2B采购指南
采购需明确三个核心参数：总浓度（30%最常用）、Acr/Bis比例（29:1适合大多数蛋白分离，37.5:1适合小分子量蛋白）、是否含TEMED和过硫酸铵（预混型操作简便但保质期短）。 电泳级产品要求丙烯酰胺纯度≥99.9%，重金属含量<5ppm。国际品牌如Bio-Rad、Sigma价格较高（约500元/100mL），国产优质品牌如索莱宝、生工约200-300元/100mL。建议小批量采购确保新鲜度，避免囤货。
常见问题
29:1和37.5:1有什么区别？
29:1（甲叉占比3.3%）形成的凝胶孔径较大，适合10-200kDa蛋白；37.5:1（甲叉占比2.6%）孔径更小，适合<10kDa小分子量分离。可根据目标蛋白大小选择。
溶液变黄还能用吗？
轻微变色可能只是光氧化产物，不影响使用；但若出现浑浊或絮状物，说明已自聚，必须废弃。为保险起见，储存超过3个月的溶液不建议用于重要实验。
如何延长保存期？
分装至棕色瓶，充氮气后-20℃储存可延长至1年。使用时恢复至室温再开盖，避免冷凝水污染。添加0.45μm滤膜过滤可去除可能的聚合起始点。
替代交联剂有哪些？
特殊应用可用PDA（piperazine diacrylamide）替代甲叉，形成更均匀的孔径；PDA交联的凝胶更透明，但价格昂贵（约10倍于常规溶液）。
自聚失败怎么办？
检查过硫酸铵是否失效（新鲜配制10%溶液应为无色透明），TEMED是否开封过久（建议小瓶分装）。提高室温至25℃以上，或适当增加引发剂浓度（但不超过0.1%过硫酸铵和0.1%TEMED）。